大鼠胰腺B細胞，咨詢，技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。拜力提供ATCC 細胞|細胞系|細胞株|腫瘤細胞|細胞|貼壁 細胞|懸浮細胞|,細胞庫管理規(guī)范,提供的細 胞株背景清楚,提供 參考文獻和*培養(yǎng)條件。

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冷凍細胞操作步驟：

1．收集對數(shù)生長期細胞；
2．以25μl臺盼藍溶液稀釋25μl細胞懸液；用血球計數(shù)板計數(shù)并計算細胞存活率（至少應(yīng)該在90%以上）；
3．細胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘；
4．將沉淀的細胞重新懸浮在冷凍液中（大約5?06細胞/0.5 ml 冷凍液）；
5．將細胞懸液加入到冷凍管中，每管0.5 ml；
6．將冷凍管置于-80℃冰箱中；
7．24小時后，將冷凍管移入液氮罐中；
8．在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時能夠找到每一個冷凍管。

細胞復(fù)蘇操作步驟：
1．將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中，冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染，不定時攪拌加速解凍；
2．當細胞*解凍后，用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒；
3．將解凍后細胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中；
4．細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘；
5．棄上清，將細胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中；
6．將細胞轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)瓶，CO2孵箱中培養(yǎng)；
7．是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度，如果細胞密度過高，用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度。

培養(yǎng)條件：
*培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%

傳代方法：
收到細胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 （一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整 個瓶消毒后放到超菌 臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
（二）如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中， 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分 散，輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代；2~3天1次。